медицинский портал

Разделы медицины

  • Информация
    • Акушерство и гинекология
    • Детская хирургия
    • Гастроэнтерология
    • Колопроктология
    • Нейрохирургия
    • Онкология
    • Отоларингология
    • Пластическая хирургия
    • Сосудистая хирургия
    • Травматология и ортопедия
    • Урология
    • Флебология
    • Хирургия
    • Эндокринология
    • Препараты
    • Пациентам

Методы диагностики рака

Основные методы диагностики рака – гистологическое, цитологическое, иммуно-гистохимическое исследование, молекулярные методики.

Гистологическое исследование для диагностики рака

Стандартное гистологическое исследование включает такие элементы, как проведение фиксации формальдегидом, фиксация ткани в парафине и окрашивание гематоксилином и эозином с последующим микроскопическим исследованием. Патологическое исследование препаратов в онкологии включает ряд дополнительных методов, которые дополняют стандартное исследование и дают дополнительную информацию. Применение электронной микроскопии, которая доступна уже на протяжении 40 лет, позволяет дифференцировать ряд опухолей на основе изучения их субклеточных структур. Более поздние методы, такие как цитогенетическое исследование, иммуногистохимическое, анализ ДНК на основе проточной цитометрии, молекулярный генетический анализ, также оказывают неоценимую помощь в установлении диагноза онкологического заболевания.

Цитологическое исследование

Цитологический метод диагностики рака базируется на изучении отдельных клеток. Клеточный материал получают с помощью ТАБ, браш-биопсии или соскоба (выскабливания) эпителия. При необходимости такой материал может быть транспортирован в виде суспензии. После его подвергают центрифугированию, наносят на предметное стекло, фиксируют и окрашивают. К основной задаче цитологического исследования относят проведение дифференциального диагноза между доброкачественным и злокачественным заболеванием без точного морфологического заключения. Окрашивание при цитологическом анализе позволяет дать более подробную информацию. Однако для этого хирургу необходимо забрать для исследования больший объем ткани. Частота ложноположительных ответов даже после адекватно выполненного исследования составляет немногим менее 1%, тогда как вероятность получения ложноотрицательного ответа значительно больше.

Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимия (ИГХ) основывается на использовании антител к специфическим антигенам, преимущественно с осажденными на микроскопическом стекле белками. Антитела могут быть мечены флуоресцирующими молекулами либо ферментами (например, пероксидазой или щелочной фосфатазой), которые при внесении определенного субстрата расщепляют его с образованием окрашенных продуктов. Диапазон исследуемых антигенов включает как известные комплексы, такие как поверхностные рецепторы, гормоны, белки, в чью функцию входит контроль процессов пролиферации и дифференцировки, так и субстраты, функция которых на сегодняшний день остается неясной. В настоящее время возможно получение в достаточных количествах моноклональных антител, которые с высокой специфичностью связываются с конкретным эпитолом антигена. Отмечается высокая воспроизводимость результатов метода диагностики рака. Иногда на основе иммуногистохимического исследования проводят дифференциальную диагностику доброкачественного и злокачественного процесса. При неходжкинских лимфомах и лейкозах отмечается моноклональность лейкоцитов, что считают важным для установления злокачественности этих опухолей. Например, при В-клеточных лимфомах или лейкозах иммуногистохимическое исследование позволяет обнаружить клетки с содержанием легких капп аили лямбда-цепей при их патологическом соотношении более, чем 2:1. Однако более часто иммуногистохимическое исследование применяют для классификации злокачественных новообразований. Используя диагностический набор антител, которые высокоспецифичны к промежуточным филаментам и поверхностным клеточным антигенам, можно эффективно отличить недифференцированные саркомы от анапластических лимфом, меланом и сарком. Данный метод диагностики рака также незаменим в проведении сложной классификации лимфом.

Цитометрия для диагностики рака

С помощью проточной цитометрии или микроскопического анализа изображений возможно провести изучение ДНК крови, жидких сред организма или плотных новообразований. Для проведения проточной цитометрии клетки или их ядра окрашивают специальным флуоресцирующим красителем, который в строгом соотношении связывается с ДНК. Через суспензию клеток с приобретенной окраской пропускают луч лазера. Вызванная флуоресценция улавливается фотоэлектронным умножителем. Анализ изображений проводится с помощью микроскопов, которые в качестве эталона используют суспензию неокрашенных индивидуальных клеток. Измеряют число хромосом (или плоидность). При наличии злокачественных опухолей имеет место увеличение числа хромосом (анеуплодия). Также при этом методе диагностике рака возможно определение как фракции в S-фазе, так и в пропорции клеток с двойным набором хромосом. Теоретически, такая полученная информация имеет важное прогностическое значение. Однако на практике ряд доброкачественных новообразований также может демонстрировать клеточную популяцию с анеуплодией. Результаты анализа во многом зависят от способа фиксации и условий окраски.

Молекулярные методы диагностики рака

В диагностике рака молекулярная биологическая техника включает проведение анализа характерных нуклеотидных последовательностей, которые обычно присутствуют в злокачественных клетках. В последнее время молекулярные тесты становятся более объективными, чем световая микроскопия, и требуют меньшего опыта для интерпретации результатов. В общем молекулярные генетические тесты это более чувствительные методы диагностика рака, чем световая микроскопия или иммуногистохимическое исследование. Однако большинство молекулярных генетических тестов требует значительного времени и материальных затрат.

Флуоресцентная гибридизация in situ позволяет обнаруживать хромосомные нарушения при помощи светового микроскопа. Кариотипирование или изображение хромосом получают в результате окраски сжатых хромосом, выделенных из клеток в период метафазы клеток, по Гимзе. Специфический интересующий участок подвергают гибридизации зондами из ДНК, которые распознаются селективными антителами, меченными флюорохромом. В отличие от указанного метода, гибридизация in situ используется для обнаружения РНК и экспрессии генов. Исследование может быть выполнено на препаратах, фиксированных формалином и залитых в парафин. Основное применение этого метода диагностики рака – типирование тканей, которые дают начало новообразованию. Особенно это позволяет обнаруживать гены, ответственные за развитие нейроэндокринных опухолей.

Southern-blotting служит методом выявления нарушений последовательности нуклеотидов в ДНК, особенно часто возникающих в ней при трансляции или амплификации. Чужеродная ДНК, например, вирусная, также может быть обнаружена этим методом диагностики рака. Блоттинг или трансферинг можно применять и для выявления РНК (Nothern blotting) ли протеинов (Western blogging).

Более современным, но и более технически сложным методом диагностики рака служит полимерная цепная реакция (ПЦР). При этом участок ДНК подвергается многократной амплификации in vitro, при условии, что известна ближайшая к нему последовательность нуклеотидов. Пары олигонуклеотидов, или праймеры, встраиваются ДНК рядом со специфическими последовательностями нуклеотидов по обоим концам участка, который подвергают амплификации. ДНК-полимераза затем копирует ДНК по образцу между встроенными нуклеотидами. Эта процедура может проводиться и в отношении РНК путем обратной транскрипции с РНК одноцепочечной комплементарной ДНК (кДНК) с помощью РНК-зависимой ДНК-полимеразы.

Существует метод диагностики рака по определению хромосомных аномалий. Специфические патологические хромосомные аномалии наиболее полно описаны для лейкемии и для лимфомы, и есть данные о хромосомных аномалиях при солидных опухолях. Наиболее часто мутации происходят по механизму транслокации, делеции или амплификации. Филадельфийская хромосома (Ph), выявляемая практически у 99% пациентов, страдающих миелолейкозом, – одна из первых хромосомных аномалий, описанных для злокачественных процессов. Она представляет собой хромосому, образовавшуюся в результате реципрокной транслокации между хромосомой 9 и 22. Аналогично, костная и некостная формы саркомы Юинга ассоциированы с t (11;22) транслокацией.

Видео:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Купить другую книгу из каталога

Медицинский сайт Surgeryzone

© 2010  
Информация не является указанием для лечения. По всем вопросам обязательна консультация врача.
Создание сайта: веб-студия "Квітка на камені"