Анализ кала на гельминты является важным диагностическим исследованием в случае заболеваний с рвотой, диареей и потерей веса.
Наиболее часто применяемые методики анализов кала на гельминты включают: нативный мазок в физиологическом растворе (влажный препарат), окрашенный мазок и флотацию фекалий. Для оценки ларвальных стадий паразитов показано применение методики Бермана.
Нативный мазок на гельминты
Всегда следует использовать свежий кал для анализа на гельминтов (в идеале с давностью не более 2 часов), чтобы сохранить подвижность трофозоидов, таких как Giardia spp. и Tritrichomonas foetus. Небольшое количество фекалий помещают на теплое предметное стекло и добавляют одну каплю 0,9% солевого раствора. Важно, чтобы мазок не был слишком толстым, поскольку можно не заметить трофозоиды.
Простое общеизвестное правило состоит в том, чтобы через мазок можно было прочитать мелкий газетный шрифт. После прикрытия мазка покровным стеклом оценивают подвижные микроорганизмы под 10-кратным увеличением и затем под 40-кратным увеличением с целью подтверждения.
Окрашенный мазок кала на гельминты
Окрашенные мазки традиционно изучают, чтобы оценить: наличие эндоспор, связанных с Clostridium perfringens; наличие спиралевидных грамотрицательных бактерий, соответствующих Campylobacter spp.; наличие повышенного количества лейкоцитов. К сожалению, диагностическая ценность повышенного количества эндоспор в фекалиях весьма ограничена, поскольку у некоторых здоровых людей без диареи также может быть повышенное количество эндоспор в фекалиях. Кроме того, отсутствует корреляция между обнаружением повышенного количества эндоспор в фекалиях и наличием энтеротоксина. Присутствие спиралевидных бактерий в анализе кала на гельминтов следует интерпретировать с осторожностью, поскольку существует ряд Campylobacter spp., часть из которых могут быть непатогенными. Возможно, лучше всего окрашенные мазки помогают в диагностике Histoplasma или Prototheca. Диагностическую ценность окрашенных мазков фекалий можно повысить, используя ватную палочку, которую вводят в прямую кишку и осторожно поворачивают несколько раз. Затем ватную палочку прокатывают по предметному стеклу, мазок просушивают на воздухе и окрашивают. Однако данный метод забора такого образца не является идеальным для посева на питательные среды, для этого лучше использовать пробу кала.
Флотация фекалий
Этот метод анализа кала на гельминтов показан для выявления цист, ооцист и яиц в фекалиях. По возможности, всегда нужно исследовать свежие фекалии. Для выявления цист, ооцист или яиц паразитов с помощью методики концентрации можно использовать свежий образец после хранения в холодильнике в течение максимально 72 часов. Если исследование нужно отложить более чем на 72 часа, свежие фекалии также можно поместить в 10% буферный раствор формалина. Образцы, фиксированные в формалине, подходят для проведения методики концентрации, окрашивания для выявления кислотоустойчивых бактерий и иммунологического анализа. Хотя методы стоячей (гравитационной) флотации выполняются легче и быстрее, чем флотация с центрифугированием, имеется множество доказательств в поддержку большей чувствительности (до восьми раз) последнего метода. У больных с низкой концентрацией паразитов при применении гравитационного метода может быть получен ложноотрицательный результат.
Необходимо принять во внимание, что метод флотации фекалий имеет ограничения, и этот анализ кала на гельминты не следует использовать для выявления тяжелых яиц, которые не всплывают (например, Paragonimus), или ларвальных стадий (например, Aelurostrongylus).
Важно учитывать тип и удельный вес применяемой флотационной среды. Автор рекомендует применять для флотации сульфат цинка с удельным весом 1,18-1,2. Этот раствор и удельный вес оптимальны для флотации яиц и цист Giardia, в то же время он поддерживает структурные элементы цист Giardia.
Процедура флотации с использованием центрифуги
- Приготовьте эмульсию из фекалий, используя 5 г фекалий и 30 мл насыщенного солевого раствора или сульфата цинка.
- Профильтруйте эмульсию через чайное ситечко или марлю в 15-мл коническую центрифужную пробирку. Для облегчения наполнения пробирки используйте воронку.
- Наполните пробирку флотационной средой до образования положительного мениска жидкости.
- Сверху на пробирку положите покровное стекло.
- Сбалансируйте пробирку в центрифуге.
- Центрифугируйте пробирки в течение 10 минут при 400-600 G (приблизительно 15 000 об/мин).
- Осторожно снимите покровные стекла с пробирок, поднимая их строго вертикально, и поместите их на предметное стекло микроскопа.
- Исследуйте материал на предметном стекле в течение 10 минут. Вначале используйте 10-кратное увеличение, а затем 40-кратное увеличение, чтобы подтвердить выявление микроорганизма путем визуализации его внутренних структур и измерения его величины.
Модификация метода. Если используется центрифуга с угловым ротором, у которой нет свободно колеблющихся контейнеров, применяется вышеописанная методика, но центрифужная пробирка заполняется до уровня в пределах 2,5 см до края (или около того), а при последнем вращении не накладывается покровное стекло. Когда завершается последний этап центрифугирования, пробирку осторожно устанавливают вертикально в штатив для тестовых пробирок. Затем с помощью пипетки осторожно доливают флотационный раствор по внутренней стенке пробирки, старясь при этом как можно меньше нарушать целостность верхнего слоя. После образования положительного мениска сверху помещают покровное стекло. Пробирка должна стоять не более 5 минут. Затем покровное стекло убирается, помещается на предметное стекло микроскопа и изучается, как было описано в пункте 8.
Иммунологический анализ кала на гельминты
Морфологическое определение цист Giardia или ооцист Cryptosporidium путем флотации фекалий требует хорошего знания методики и больших затрат времени. При выполнении иммунологического анализа кала на гельминты нет необходимости в морфологическом распознавании, он зависит только от наблюдения за колориметрической реакцией в лунках. Кроме того, иммунологический анализ можно выполнять на формалинизированных или замороженных фекалиях.
Статью подготовил и отредактировал: врач-хирург Пигович И.Б.