Значительно возросла распространенность терминальной стадии хронической почечной недостаточности (ТХПН), подлежащей гемодиализу (ГД) — основному поддерживающему лечению. Из-за невозможности постоянного диализа, общее состояние таких пациентов остается тяжелым. Кроме того, высока вероятность смерти больного ТХПН из-за сердечно-сосудистых заболеваний.
Тяжесть клинических проявлений требует крупных совместных комплексных исследований совокупности всех белков плазмы человека — протеомов. Применение анализа протеомов плазмы используется в исследованиях злокачественных опухолей, сердечно-сосудистых и инфекционных заболеваний. Так, например, Chu с коллегами при обследовании находящихся на гемодиализе пациентов выявляли токсичные продукты, накапливающиеся в сыворотке. Langlois и соавторами пытались обнаружить различия протеома сыворотки крови больных и здоровых участников. Weissinger с коллегами с помощью метода CE-ESI-TOF MS изучали влияние перорального приема витамина С на профиль плазменных полипептидов у гемодиализных пациентов.
Настоящее исследование предполагает, что протеомы плазмы длительно находящихся на гемодиализе больных (ДГД) могут отличаться от тех, кто получил короткий курс гемодиализа (КГД). Кроме того, с учетом гемодинамического стресса при диализе возможно изменение некоторых защитных и полезных маркеров. Для решения этой проблемы, провели сравнение протеомов плазмы пациентов с ТХПН, получающих гемодиализ разное время. Впоследствии при помощи MALDI-TOF масс-спектрометрии были изучены белки разной экспрессии. В частности, в течение 4-летнего проспективного наблюдения с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) у 60 пациентов, находящихся на ГД, измерялся уровень в плазме крови потенциального белкового маркера витамин D-связывающего белка (ВДСБ) и охарактеризовано его клиническое значение. Настоящее исследование белков плазмы гемодиализных пациентов может выступать в качестве эталона выявления потенциальных биомаркеров для прогнозирования течения процесса.
МЕТОДЫ: Для сравнения протеомов плазмы исследовали 6 больных ТХПН без сахарного диабета, среднего возраста 60.0±17.1 лет, длительно находящихся на ГД (срок диализа 14,9 ± 4,1 лет) и 6 больных ТХПН, среднего возраста 68,4±15,2лет, сопоставимых по полу, уремической этиологии, но получающих ГД относительно короткое время (срок диализа 5,3 ± 2,9 года). В обеих группах было следующее гендерное распределение: 4 женщины и 2 мужчины. Для определения клинической значимости определяемых белков, в исследование было введено еще 60 пациентов без диабета с ГД.
Во избежание возможного элиминирования изучаемых белков, все образцы плазмы собирались в середине недели до начала диализа. Двухмерный гель-элекрофорез собранной плазмы проводился в индивидуальном порядке. Перед проведением электрофореза все образцы плазмы тщательно проверили на отсутствие гемолиза, который мог бы повлиять на результаты. Концентрацию белка определяли с помощью PlusOne 2-D Quant Kit (GE Healthcare, Piscataway), в соответствии с инструкцией производителя. Также использовался иммуноферментный анализ и Kaplan-Meier анализ.
РЕЗУЛЬТАТЫ: По сравнению с пациентами, короткое время находящимися на ГД, у пациентов с длительным ГД возрос уровень сывороточного витамин D-связывающего белка и было выявлено снижение кластерина, аполипопротеина A-IV, гаптоглобина, гемопиксина, факторов комплемента B и H, изменение изоформ ?1-антитрипсина и фибриногена гамма. В течение 45,7 ± 15 месяцев наблюдения из 60 пациентов на ГД умерло16 (26.7%).
Kaplan-Meier анализ показал, что пациенты с самым низким тертилем базового уровня ВДСБ имеют значительно более высокий уровень смертности. Многомерный анализ регрессии Кокса также отметил, что витамин Д-связывающий белок является независимым предиктором смерти. Кроме того, этот анализ выявил факторы, в значительной степени связанные со смертностью: пожилой возраст, гипоальбуминемия и низкий фракционный клиренс мочевины (р
Таким образом, измененные белки плазмы пациентов, длительно находящихся на гемодиализе, причастны к ускорению развития атеросклероза, дефекту антиоксидантной активности, усилению воспалительной активности/инфекции и органной дисфункции. Кроме того, снижение базового уровня сывороточного витамин Д-связывающего белка на ГД коррелирует со смертностью. Полученные результаты свидетельствуют о том, что протеомные исследования больных на ГД могут помочь раскрыть потенциальный биомаркер прогноза состояния пациентов, находящихся на гемодиализе.