медицинский портал

Разделы медицины

  • Информация
    • Акушерство и гинекология
    • Детская хирургия
    • Гастроэнтерология
    • Колопроктология
    • Нейрохирургия
    • Онкология
    • Отоларингология
    • Пластическая хирургия
    • Сосудистая хирургия
    • Травматология и ортопедия
    • Урология
    • Флебология
    • Хирургия
    • Эндокринология
    • Препараты
    • Пациентам
▼ Я покупаю ссылки здесь ▼

Культивирование фибробластов

Пост опубликован: 07.12.2020

Технология выращивания различных клеточных культур на микроносителях достаточно хорошо изучена, однако применительно к фибробластам и кератиноцитам практически не использовалась. Данные по управляемому культивированию фибробластов в биотехнологических системах на микроносителях в литературе отсутствуют. Первые опыты использования фибробластов, выращенных на микроносителях, показали, что они достаточно быстро мигрируют с микроносителей на коллагеновый гель. Это даёт основание предполагать, что фибробласты также могут мигрировать с микроносителей на раневую поверхность.

Коллективом цитобиологов под руководством доктора биологических наук В.В. Терских была разработана технология культивирования клеток кожи на микроносителях, представляющих собой микросферы, к которым прикрепляются клетки и которые при перемешивании могут находиться в питательной среде во взвешенном состоянии. Кроме того, выращивание клеток на микроносите-

лях может решить и другие технические задачи указанного метода: создать значительный запас клеточных культур, упростить процедуру трансплантации и значительно удешевить лечебный процесс.

Для создания модифицированного дермального эквивалента сначала выделяли коллаген I типа из сухожилий хвостов крыс линии Вистар, затем получали трёхмерный коллагеновый гель.

Для получения первичной культуры фибробластов использовали кожу плода человека. Обработанные кусочки кожи пипетировали и полученную взвесь клеток помещали в биореактор и выращивали на микроносителях «Цитолар 1». После того как фибробласты покрывали не менее 50% площади микроносителей, их отделяли от питательной среды, переносили в чашку Петри и заключали в трёхмерный коллагеновый гель.

Качество и пригодность микроносителей определяется их способностью обеспечивать эффективное прикрепление субстратзависимых клеток, которыми являются фибробласты кожи человека. Это во многом определяет ход всего процесса выращивания клеток.

В ходе эксперимента было использовано три типа микроносителей:

  • «Цитолар 1» — поперечносшитый желатиновый микроноситель;
  • «Cytodex3» — поперечносшитый декстрановый микроноситель, покрытый коллагеном;
  • «Gelatin coated»— желатиновый микроноситель.

Оценку эффективности прикрепления фибробластов к различным микроносителям проводили, анализируя радиоактивность ранее меченых прикрепившихся клеток. Для этого фибробласты кожи человека культивировали в течение 7 сут в среде, содержащей меченый предшественник ДНК [14С]тимидин. Затем клетки, содержащие меченую ДНК в концентрации 300 тыс./мл вносили во флаконы, содержащие суспензии микроносителей и имеющие одинаковую площадь поверхности. Инкубирование осуществляли в течение 24 ч. Затем фиксировали клетки на микроноситель и вносили в сцинтилляционную жидкость. На счётчике определяли радиоактивность включившегося [14С]тимидина.

Проанализировав экспериментальные данные, выявили, что по эффективности прикрепления клеток наилучшим микроносителем является «Цитолар 1».

Ещё одним важным свойством микроносителей является их оптическая проницаемость, позволяющая микроскопически оценивать состояние клеточной культуры на микроносителях. Микроносители

«Цитолар 1» не уступали по этому критерию микроносителям «Cytodex 3» и значительно превосходили микроносители «Gelatin».

Таблица. Количественная оценка прикрепления фибробластов к поверхности микроносителей

Тип микроносителя Прикрепление клеток к микроносителям
тыс./мл %*
Цитолар 1 289,3±0,9 100
Cytodex 3 220,1±1,2 76
Gelatin 165,2±1,5 57

Примечание.* Прикрепление к микроносителям «Цитолар 1» взято за 100%.

Таким образом, учитывая экономические соображения, эффективность прикрепления клеток к поверхности микроносителей и оптическую прозрачность последних для дальнейшего использования, были выбраны микроносители «Цитолар 1».


Статью подготовил и отредактировал: врач-хирург Пигович И.Б.

Видео:

Полезно:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Купить другую книгу из каталога

Медицинский сайт Surgeryzone

© 2010  
Информация не является указанием для лечения. По всем вопросам обязательна консультация врача.




Adblock detector