По современным представлениям, ревматические заболевания относятся к иммуновоспалительным болезням человека, в патогенезе которых ключевую роль играют аутоиммунитет и аутовоспаление. Наиболее яркими примерами иммуновоспалительных ревматических заболеваний являются ревматоидный артрит , системная красная волчанка, системная склеродермия, системные васкулиты, дерматомиозит, полимиозит, а также ювенильные артриты, спондилоартриты и псориатический артрит. Прогноз системных ревматических заболеваний, характеризующихся тяжелым течением и высокой летальностью, во многом зависит от ранней диагностики.
В настоящее время лабораторная диагностика ревматических заболеваний включает определение широкого перечня биомаркеров (аутоантител, белков острой фазы воспаления, цитокинов, маркеров повреждения эндотелия, компонентов системы комплемента, иммуноглобулинов, криоглобулинов, субпопуляций лимфоцитов) на клеточном и гуморальном уровнях. Пройти диагностику различных заболеваний можно в Атолл — лечебно-диагностический центр.
Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний основаны на критериях доказательной медицины, обеспечивающих оптимальное использование иммунологических лабораторных тестов.
Центральное место в лабораторной диагностике ревматических заболеваний занимают серологические тесты для обнаружения циркулирующих аутоантител. Основными маркерами ревматических забоелваний являются антинуклеарные антитела (АНА), ревматоидные факторы (РФ), антитела к циклическому цитруллинированному пептиду, антифосфолипидные антитела и антинейтрофильные цитоплазматические антитела . Положительные результаты определения этих аутоантител входят в число диагностических критериев ряда системных ревматических заболеваний и могут использоваться при оценке активности и прогноза этих заболеваний. Кроме того, обнаружение аутоантител представляется важным для ранней диагностики и характеристики клинико-лабораторных субтипов ревматических заболеваний. По данным проспективных исследований, аутоантитела также могут служить предикторами развития аутоиммунных ревматических заболеваний.
Особое внимание в последние годы уделяется изучению клинико-диагностического значения ревматоидного фактора и антител к цитруллинированным белкам/пептидам.
Наряду с идентификацией аутоантител одним из ведущих аспектов диагностики ревматических заболеваний является исследование маркеров воспаления в крови (СОЭ, СРБ, сывороточного амилоидного белка, ферритина, прокальцитонина, аполипопротеина А, кальпротектина и др.)
Значительный прогресс в оценке значения аутоантител был достигнут стандартным иммунологическим методам исследования (реакций агглютинации, фиксации комплемента и иммунопреципитации, двойной иммунодиффузии по Оухтерлони, контриммуноэлектрофореза, радиоиммуноанализа — РИА, нефелометрии, непрямой реакции иммунофлюоресценции — НРИФ, иммуноферментного анализа — ИФА, иммуноблоттинга) . На рубеже ХХ—ХХІ вв. бурное развитие лигандных методов иммуноанализа с использованием флюоресцентных, ферментных и люминесцентных меток, применение новых высокоочищенных аутоантигенов и моноклональных антител, полученных на основе генно-инженерных технологий, появление высокотехнологичных автоматизированных анализаторов с блоком термостатирования и проточной кюветой, внедрение информационных систем позволили значительно повысить диагностическую точность и чувствительность иммунологических лабораторных тестов, а также расширить спектр определяемых биомаркеров РЗ. В частности, использование в качестве аутоантигенов циклических цитруллинированных пептидов привело к созданию высокочувствительных и высокоспецифичных тест-систем 2 и 3 поколения для иммуноферментного определения АЦЦП. Предложены новые технологии для выявления аутоантител при РА: иммунохемилюминесцентный метод определения АЦЦП в сыворотке крови на анализаторе «Cobas e411» («Roche», Швейцария), а также полуколичественные иммунохроматографические экспресс-методы обнаружения IgM РФ, АМЦВ («Rheumachec» фирмы «Orgentec», Германия) и АЦЦП («CCPointTest» фирмы «Euro-Diagnostica AB», Швеция) в цельной крови с помощью тест-полосок на мембранной основе. Разработан метод ИФА повышенной чувствительности для диагностики АНЦА-ассоциированных васкулитов, в основе которого лежит выявление АНЦА к смеси нативной и рекомбинантной протеиназы 3 человека, нанесенной на поверхность лунок микроплат.
Традиционные методы иммунодиагностики позволяют в одном образце биологического материала больного единовременно определять с помощью одного теста только один лабораторный маркер, тогда как для ревматических заболеваний характерно наличие множества циркулирующих аутоантител, цитокинов, острофазовых белков, показателей активации эндотелия, генетических и метаболических маркеров. К ограничениям данных технологий относят также низкую межлабораторную сопоставимость полученных результатов, длительность выполнения, трудоемкость и высокую стоимость анализов.
В ревматологии наиболее перспективными методами мультиплексного анализа являются протеомные технологии. Так, в настоящее время разработаны тест-системы для скрининга диагностических аутоантител с использованием планарных микрочипов и суспензионных мультиплексных технологий хМАР. Также созданы коммерческие наборы, базирующиеся на технологии хМАР, которые позволяют одновременно исследовать широкий спектр других биомаркеров (острофазовых белков, цитокинов, хемокинов, факторов роста, растворимых клеточных молекул адгезии — рКМА, металло- протеиназ, маркеров апоптоза и др.), играющих важную роль в оценке иммунопатогенетических особенностей, прогноза и эффективности терапии РЗ.
K. Raza и соавт. провели измерение 23 цитокинов методом хМАР в синовиальной жидкости у 36 больных с ранним артритом длительностью менее 6 мес, 9 больных с ревматоидным артритом длительностью более 6 мес, 12 больных подагрическим артритом и 4 больных остеоартрозом. Авторами показано селективное транзиторное увеличение концентрации ИЛ 2, 4, 13, 17, 15, bFGF и EGF у 8 больных ранним ревматоидным артритом в течение первых 3 мес после появления клинических симптомов заболевания и повышение уровня интерферона y (ИФН у) у 14 больных с недифференцированным, псориатическим и другими вариантами неревматоидного персистирующего артрита на ранней стадии болезни.
Протеомные микрочипы применяются в исследованиях, связанных с поиском биомаркеров аутоиммунных ревматических заболеваний . Впервые антигенный микрочип, содержавший 18 белков и нуклеиновых кислот, был протестирован TO. Joos и соавт. на сыворотках 25 больных аутоиммунными заболеваниями и 10 здоровых доноров. Чувствительность и специфичность данного микрочипа для определения аутоантител совпадали с таковыми у ИФА. W.H. Robinson и соавт., использовавшие при изучении аутоантител в сыворотках у 50 больных ревматоидным артритом протеомный микрочип на основе 196 различных антигенов, установили, что его чувствительность и специфичность в 2—3 раза выше, чем у ИФА. W. Hueber и соавт. разработали синовиальные антигенные микрочипы из 225 пептидов и протеинов для идентификации различных профилей аутоантител при ревматоидном артрите.
Революционным достижением фармакотерапии ревматических заболеваний конца XX в. является разработка принципиально новой группы лекарственных средств, получивших название генно-инженерных биологических препаратов (ГИБП). К ним относят в первую очередь моноклональные антитела против определенных детерминант иммунокомпетентных клеток (анти-В-клеточные препараты — ритуксимаб; блокаторы костимуляции Т-клеток — абатацепт) или провос-палительных цитокинов. Достоинством ГИБП является их селективное воздействие на определенные звенья иммунопатогенеза ревматических заболеваний. Все это вместе взятое обусловливает необходимость дальнейшего совершенствования иммунологических методов мониторинга и поиска предикторов ответа на терапию ГИБП.
В многочисленных исследованиях показано, что ингибиторы ФНО а, ритуксимаб и тоцилизумаб индуцируют выраженное снижение уровня маркеров острой фазы воспаления (СОЭ, СРБ, САА) при ревматоидном артрите.
В последние годы мультиплексные технологии активно используются в транскриптомных исследованиях для изучения экспрессии профилей генов в синовиальной ткани и периферической крови у больных ревматическими заболеваниями в зависимости от проводимой терапии ГИБП.
Одним из факторов резистентности к ГИБП (инфликсимабу, адалимумабу, ритуксимабу и др.) является их потенциальная иммуногенность. Вследствие этого значительный интерес представляют тест-системы, позволяющие измерять концентрацию антител человека к химерным (НАСА) и человеческим (НАНА) моноклональным антителам, а также уровни самих ГИБП в сыворотке крови с помощью РИА и ИФА.
Важное место в лабораторной диагностике ревматических заболеваний занимают исследования, связанные с определением иммунологических маркеров инфекционных осложнений, развивающихся на фоне лечения ГИБП. В частности, наряду с кожным туберкулиновым тестом для выявления латентной туберкулезной инфекции и активного туберкулеза у больных ревматическими заболеваниями при планировании и в ходе лечения блокаторами ФНО а применяются новые, более чувствительные и специфичные лабораторные тесты — QuantiFeron (QFT)-TB Gold и QuantiFeron (QFT)-TB Gold In Tube («Celestis», Австралия), а также T-SPOT.TB («Oxford Immunotec», Великобритания), основанные на измерении ex vivo продукции ИФН у, высвобождаемого Т-лимфоцитами в ответ на стимуляцию специфичными антигенами Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10 и TB7.7 (IFNy release assays — IGRAs).
Таким образом, в последнее время в ревматологии наряду с традиционными («классическими») методами лабораторной диагностики все шире применяются мультиплексные аналитические технологии, что позволяет радикально улучшить раннюю диагностику (возможно, на доклинической стадии), прогнозирование исходов патологического процесса, эффективность и безопасность фармакотерапии при ревматических заболеваний, а также существенно снизить затраты на обследование пациентов.