Современная диагностика ревматических заболеваний

По современным представлениям, ревматические за­болевания  относятся к иммуновоспалительным болезням человека, в патогенезе которых ключе­вую роль играют аутоиммунитет и аутовоспаление. Наиболее яркими примерами иммуновоспалительных ревматических заболеваний являются ревматоидный артрит , системная красная волчанка,  системная склеродер­мия, системные васкулиты, дерматомиозит, полимиозит, а также ювенильные артриты, спондилоартриты и псориатический арт­рит. Прогноз системных ревматических заболеваний, характеризующихся тяжелым течением и высокой летальностью, во многом зависит от ранней диагностики.

В настоящее время лабораторная диагностика ревматических заболеваний включает определение широкого перечня биомаркеров (аутоантител, белков острой фазы воспаления, цитокинов, мар­керов повреждения эндотелия, компонентов системы комп­лемента, иммуноглобулинов, криоглобулинов, субпопуля­ций лимфоцитов) на клеточном и гуморальном уровнях. Пройти диагностику различных заболеваний можно в Атолл — лечебно-диагностический центр.

Современные стандарты лабораторной диагностики ревматических заболеваний основаны на критериях доказательной медицины, обес­печивающих оптимальное использование иммунологиче­ских лабораторных тестов.

Центральное место в лабораторной диагностике ревматических заболеваний занимают серологические тесты для обнаружения циркулирующих аутоантител. Основными маркерами ревматических забоелваний являются антинуклеарные антитела (АНА), ревматоидные факторы (РФ), антитела к циклическому цитруллинированному пептиду, антифосфолипидные антитела и антинейтрофильные цитоплазматические антитела . Положительные результаты определения этих аутоантител входят в число диагностических критериев ряда системных ревматических заболеваний и могут использоваться при оценке активно­сти и прогноза этих заболеваний. Кроме того, обнаруже­ние аутоантител представляется важным для ранней диаг­ностики и характеристики клинико-лабораторных субти­пов ревматических заболеваний. По данным проспективных иссле­дований, аутоантитела также могут служить предикторами развития аутоиммунных ревматических заболеваний.

Особое внимание в последние годы уделяется изуче­нию клинико-диагностического значения ревматоидного фактора и антител к цитруллинированным белкам/пептидам.

Наряду с идентификацией аутоантител одним из ве­дущих аспектов диагностики ревматических заболеваний является исследование маркеров воспаления в крови (СОЭ, СРБ, сывороточного амилоидного белка, ферритина, прокальцитонина, аполипопротеина А, кальпротектина и др.)

Значительный прогресс в оценке значения аутоантител был достигнут стандартным иммунологическим мето­дам исследования (реакций агглютинации, фиксации комп­лемента и иммунопреципитации, двойной иммунодиффузии по Оухтерлони, контриммуноэлектрофореза, радиоиммуноанализа — РИА, нефелометрии, непрямой реакции иммунофлюоресценции — НРИФ, иммуноферментного ана­лиза — ИФА, иммуноблоттинга) . На рубеже ХХ—ХХІ вв. бурное развитие лигандных методов иммуноанализа с ис­пользованием  флюоресцентных, ферментных и люминес­центных меток, применение новых высокоочищенных аутоантигенов и моноклональных антител, полученных на осно­ве генно-инженерных технологий, появление высокотехно­логичных автоматизированных анализаторов с блоком термостатирования и проточной кюветой, внедрение информа­ционных систем позволили значительно повысить диагно­стическую точность и чувствительность иммунологических лабораторных тестов, а также расширить спектр определяе­мых биомаркеров РЗ. В частности, использование в качестве аутоантигенов циклических цитруллинированных пептидов привело к созданию высокочувствительных и вы­сокоспецифичных тест-систем 2 и 3 поколения для им­муноферментного определения АЦЦП. Предложены новые технологии для выявления аутоантител при РА: иммунохемилюминесцентный метод определения АЦЦП в сыво­ротке крови на анализаторе «Cobas e411» («Roche», Швейца­рия), а также полуколичественные иммунохроматографические экспресс-методы обнаружения IgM РФ, АМЦВ («Rheumachec» фирмы «Orgentec», Германия) и АЦЦП («CCPointTest» фирмы «Euro-Diagnostica AB», Швеция) в цельной крови с помощью тест-полосок на мембранной ос­нове. Разработан метод ИФА повышенной чувствительности для диагностики АНЦА-ассоциированных васкулитов, в ос­нове которого лежит выявление АНЦА к смеси нативной и рекомбинантной протеиназы 3 человека, нанесенной на по­верхность лунок микроплат.

Традиционные методы иммунодиагностики позволя­ют в одном образце биологического материала больного единовременно определять с помощью одного теста толь­ко один лабораторный маркер, тогда как для ревматических заболеваний характер­но наличие множества циркулирующих аутоантител, цито­кинов, острофазовых белков, показателей активации эндо­телия, генетических и метаболических маркеров. К ог­раничениям данных технологий относят также низкую межлабораторную сопоставимость полученных результа­тов, длительность выполнения, трудоемкость и высокую стоимость анализов.

В ревматологии наиболее перспективными методами мультиплексного анализа являются протеомные техноло­гии. Так, в настоящее время разработаны тест-системы для скрининга диагностических аутоантител с использованием планарных микрочипов и суспензион­ных мультиплексных технологий хМАР. Также созданы коммерческие наборы, базирующиеся на технологии хМАР, которые позволяют одновременно ис­следовать широкий спектр других биомаркеров (острофа­зовых белков, цитокинов, хемокинов, факторов роста, рас­творимых клеточных молекул адгезии — рКМА, металло- протеиназ, маркеров апоптоза и др.), играющих важную роль в оценке иммунопатогенетических особенностей, прогноза и эффективности терапии РЗ.

K. Raza и соавт. провели измерение 23 цитокинов методом хМАР в синовиальной жидкости у 36 больных с ранним артритом длительностью менее 6 мес, 9 больных с ревматоидным артритом длительностью более 6 мес, 12 больных подагрическим артритом и 4 больных остеоартрозом. Авторами показано селективное транзиторное увеличение концентрации ИЛ 2, 4, 13, 17, 15, bFGF и EGF у 8 больных ранним ревматоидным артритом в тече­ние первых 3 мес после появления клинических симпто­мов заболевания и повышение уровня интерферона y (ИФН у) у 14 больных с недифференцированным, псориатическим и другими вариантами неревматоидного персистирующего артрита на ранней стадии болезни.

Протеомные микрочипы применяются в ис­следованиях, связанных с поиском биомаркеров аутоиммунных ревматических заболеваний . Впервые антиген­ный микрочип, содержавший 18 белков и нуклеиновых ки­слот, был протестирован TO. Joos и соавт. на сыворотках 25 больных аутоиммунными заболеваниями и 10 здоровых доноров. Чувствительность и специфичность данного микрочипа для определения аутоантител совпадали с тако­выми у ИФА. W.H. Robinson и соавт., использовавшие при изучении аутоантител в сыворотках у 50 больных ревматоидным артритом протеомный микрочип на основе 196 различных ан­тигенов, установили, что его чувствительность и специ­фичность в 2—3 раза выше, чем у ИФА. W. Hueber и соавт.  разработали синовиальные антигенные микрочипы из 225 пептидов и протеинов для идентификации различных профилей аутоантител при ревматоидном артрите.

Революционным достижением фармакотерапии ревматических заболеваний конца XX в. является разработка принципиально новой группы лекарственных средств, получивших название ген­но-инженерных биологических препаратов (ГИБП). К ним относят в первую очередь моноклональные антитела против определенных детерминант иммунокомпетентных клеток (анти-В-клеточные препараты — ритуксимаб; блокаторы костимуляции Т-клеток — абатацепт) или провос-палительных цитокинов. Достоинством ГИБП является их селективное воздействие на определенные звенья иммунопатогенеза ревматических заболеваний. Все это вместе взятое обусловливает необ­ходимость дальнейшего совершенствования иммунологи­ческих методов мониторинга и поиска предикторов ответа на терапию ГИБП.

В многочисленных исследованиях показано, что ин­гибиторы ФНО а, ритуксимаб и тоцилизумаб индуцируют выраженное снижение уровня маркеров острой фазы вос­паления (СОЭ, СРБ, САА) при ревматоидном артрите.

В последние годы мультиплексные технологии ак­тивно используются в транскриптомных исследованиях для изучения экспрессии профилей генов в синовиальной ткани и периферической крови у больных ревматическими заболеваниями в зависимо­сти от проводимой терапии ГИБП.

Одним из факторов резистентности к ГИБП (инфликсимабу, адалимумабу, ритуксимабу и др.) является их по­тенциальная иммуногенность. Вследствие этого значи­тельный интерес представляют тест-системы, позволяю­щие измерять концентрацию антител человека к химер­ным (НАСА) и человеческим (НАНА) моноклональным антителам, а также уровни самих ГИБП в сыворотке крови с помощью РИА и ИФА.

Важное место в лабораторной диагностике ревматических заболеваний зани­мают исследования, связанные с определением иммуно­логических маркеров инфекционных осложнений, раз­вивающихся на фоне лечения ГИБП. В частности, наря­ду с кожным туберкулиновым тестом для выявления ла­тентной туберкулезной инфекции и активного туберку­леза у больных ревматическими заболеваниями при планировании и в ходе лечения блокаторами ФНО а применяются новые, более чувстви­тельные и специфичные лабораторные тесты — QuantiFeron (QFT)-TB Gold и QuantiFeron (QFT)-TB Gold In Tube («Celestis», Австралия), а также T-SPOT.TB («Oxford Immunotec», Великобритания), основанные на измерении ex vivo продукции ИФН у, высвобождаемого Т-лимфоцитами в ответ на стимуляцию специфичными антигенами Mycobacterium tuberculosis ESAT-6, CFP-10 и TB7.7 (IFNy release assays — IGRAs).

Таким образом, в последнее время в ревматологии на­ряду с традиционными («классическими») методами лабо­раторной диагностики все шире применяются мульти­плексные аналитические технологии, что позволяет ради­кально улучшить раннюю диагностику (возможно, на до­клинической стадии), прогнозирование исходов патологи­ческого процесса, эффективность и безопасность фарма­котерапии при ревматических заболеваний, а также существенно снизить затраты на обследование пациентов.


Статью подготовил и отредактировал: врач-хирург Пигович И.Б.

Видео:

Полезно:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *