Анализ синовиальной жидкости в зависимости от результатов (внешнего вида, общего количества лейкоцитов и доли нейтрофилов, наличия или отсутствия крови и результатов бактериологического исследования) выделяет четыре основных класса синовиальной жидкости (СЖ). Характеристики СЖ широко варьируют и могут меняться в процессе лечения. Таким образом, при диагностике артрита класс СЖ служит лишь общим ориентиром.
Визуальный анализ синовиальной жидкости
Определенные характеристики СЖ позволяют клиницисту предположить причину артропатии. Прозрачность отражает плотность того или иного вещества в СЖ. Нормальная СЖ или СЖ пациента с остеоартрозом бесцветна и прозрачна. В отличие от этого при системной красной волчанке и нетяжелом ревматоидном артрите синовиальная жидкость полупрозрачна, а при инфекционном артрите — непрозпачна. В целом прозрачность воспалительной синовиальной жидкости зависит от количества лейкоцитов. Для анализа синовиальной жидкости пациента с артритом характерна ксантохромия, что связано с проникновением в СЖ эритроцитов из воспаленной синовиальной оболочки и распадом гема. Красная или кровянистая СЖ встречается при кровотечении, связанном с травмой, гемофилии, пигментном виллонодулярном синовите и других патологических процессах. К другим веществам, способным снижать прозрачность СЖ, относят липиды, кристаллы (такие, как ДПК, мононатриевая соль мочевой кислоты или гидроксиапатит) и накапливающиеся продукты распада при деструктивных формах артрита (например, тяжелый ревматоидный артрит или артропатия Шарко).
В норме суставная жидкость вязкая благодаря присутствию гиалуроновой кислоты. При воспалительных артропатиях ферменты разрушают гиалуроновую кислоту, что приводит к снижению вязкости суставной жидкости. При выдавливании из шприца капли нормальной СЖ ее поверхностное натяжение таково, что шлейф или нить жидкости растягивается на 10 см перед обрывом капли. Чем сильнее воспаление в суставе, тем больше в нем воспалительных клеток и выше концентрация активированных ферментов, разрушающих гиалуроновую кислоту. Нить воспалительной СЖ при этом растягивается не более чем на 5 см. Очень вязкую суставную жидкость, формирующую длинную нить, наблюдают при гипотиреозе. Кроме того, содержание гиалуроновой кислоты в синовиальной жидкости определить, добавив в нее несколько капель 2% раствора уксусной кислоты. В нормальной СЖ формируется стабильный нерастворимый белково-гиалуроновый комплекс, называемый муциновым сгустком. Воспалительная СЖ образует рыхлый муциновый сгусток, который легко фрагментируется, что отражает изменение структуры гиалуроновой кислоты.
Подсчет клеток
Количество лейкоцитов и их состав — одна из наиболее ценных характеристик анализа синовиальной жидкости. Нормальная синовиальная жидкость содержит менее 200 клеток/мм3. При невоспалительной артропатии количество лейкоцитов достигает 2000 клеток/мм3. При неинфекционных артритах число лейкоцитов широко варьирует: от 2000 до 100 000 клеток/мм3. Хотя при аутоиммунных артритах количество лейкоцитов обычно колеблется в пределах 2000-30 000 клеток, при ревматоидном артрите этот показатель нередко достигает 50 000 клеток/мм3 и выше. У пациентов с артритом, вызванным кристаллами (например, при острой подагре), число лейкоцитов обычно превышает 30 000 клеток/мм3, и 50 000-75 000 клеток/мм3 вполне закономерно. Чем ближе число лейкоцитов к 100 000 клеток/мм3, тем выше вероятность септического артрита. Несмотря на то, что у некоторых пациентов число лейкоцитов может превышать 10О 000 клеток/мм3 при кристаллических артропатиях, ревмтоидном артрите и даже при серонегативных артропатиях, при получении такого результата анализа синовиальной жидкости следует начинать эмпирическое лечение септического артрита, пока не получены микробиологические данные, исключающие инфекцию.
Количество лейкоцитов менее 100000 клеток не исключает возможной инфекции. У пациентов с хроническими воспалительными артритами (такими, как СКВ или псориатический артрит) повышен риск инфицирования сустава, во-первых, в связи со структурными порреждениями сустава вследствие хронического воспаления; во-вторых, из-за иммуносупрессивного действия препаратов, которые применяются для лечения этих заболеваний. Более того, многие болезнь-модифицирующие препараты при таких заболеваниях (в частности, метотрексат, циклоспорин, лефлуномид, азатиоприн, циклофосфамид и другие цитотоксические препараты) способны подавлять лейкоцитарный ответ на инфекцию и иллюзорно уменьшать число лейкоцитов в СЖ. По сравнению с бактериальной инфекцией более вялотекущим процессам (таким, как туберкулез или грибковая инфекция) свойственно более низкое число лейкоцитов в анализе синовиальной жидкости; обычно <50000 клеток. Лейкоцитарная формула также представляет ценную информацию. СЖ при инфекционном артрите обычно содержит 95% полиморфноядерных лейкоцитов. Аналогично при кристаллических артропатиях более 90% лейкоцитов часто также представлены полиморфноядерными лейкоцитами. С другой стороны, число гранулоцитов невоспалительной СЖ не превышает 50% всех лейкоцитов. Исследование влажного препарата особенно полезно для определения клеточного и кристаллического содержимого СЖ. Наилучший влажный препарат получают, поместив содержимое шприца непосредственно на стекло, но используют также СЖ, обработанную гепарином натрия или этилен-диамин-тетрауксусной кислотой. На влажном препарате СЖ пациентов с ревматоидным артритом заметны рагоциты — полиморфноядерные лейкоциты со светопреломляющими включениями, содержащими иммунные комплексы и комплемент. Влажный препарат синовиальной жидкости больного СКВ нередко содержит волчаночные клетки. Цитологическое исследование выявляет опухолевые клетки у пациентов с метастазами в синовиальную оболочку.
Кровь в синовиальной жидкости
Наличие крови в суставе обычно обусловлено острой травмой. При выявлении гемартроза во время артроцентеза необходимо полностью эвакуировать кровянистую жидкость, чтобы предотвратить формирование синехий, уменьшающих объем движений в травмированном суставе. Гемартроз иногда обнаруживают при артропатии Шарко, что связано с хронической травмой пораженного сустава. При отсутствии травмы в анамнезе кровянистая СЖ может быть следствием травматичной аспирации. В таких ситуациях кровь в СЖ распределена неравномерно, и клиницист испытывает трудности при выполнении процедуры. Если пункция не была травматичной, но в анализе синовиальной жидкости получена кровь, необходимо исключить несколько причин. Повторные гемартрозы часто возникают у пациентов с нарушениями коагуляционного гемостаза (такими, как гемофилия и болезнь фон Виллебранда), патологией тромбоцитов и у больных, принимающих антикоагулянты. СЖ пациентов с пигментным виллонодулярным синовитом всегда геморрагическая или ксантохромная. Пигментация связана с гемосидерином, который накапливается от повторных кровоизлияний в сустав. Геморрагическую СЖ часто обнаруживают у больных туберкулезом, а также у пациентов с местными или метастатическими опухолями. У пациентов с врожденными, метастатическими или геморрагическими заболеваниями (такими, как синдром Элерса-Данло, эластическая псевдоксантома, серповидноклеточная анемия или цинга) иногда также развивается гемартроз.
Кристаллы
Хотя кристаллы в синовиальной жидкости можно идентифицировать и через несколько дней после ее получения, рекомендуют использовать свежие образцы, приготовленные сразу после аспирации. Для предотвращения свертывания СЖ перед исследованием применяют только гепарин натрия и этилен-диамин-тетрауксусную кислоту, поскольку гепарин лития и оксалат кальция вызывают формирование двояко-преломляющих кристаллов, мешающих анализу. Кроме того, стекло с препаратом СЖ необходимо накрывать покровным стеклом, так как тальк, пыль и другие инородные тела могут напоминать кристаллы.
Полноценное исследование на наличие кристаллов требует поляризационной световой микроскопии с дополнительным красным компенсатором, хот кристаллы урата натрия можно увидеть и под обычным световым микроскопом. Нижняя поляризационная пластина (поляризатор), помещенная между источником света и исследуемым образцом, блокирует все световые волны, кроме тех. что колеблются в одном направлении. Вторая поляризационная пластина (анализатор) расположена между исследуемым препаратом и глазом исследователя, под углом 90° к поляризатору. Свет не доходит до глаза исследователя, и в микроскоп он видит только темное поле. Двоякопреломляющий, или анизотропный, препарат преломляет световые волны, проходящие через поляризатор, таким образом, что они проходят через анализатор, и наблюдатель видит белые объекты на темном фоне. Если между поляризатором и анализатором поместить компенсатор первого порядка, фоновое поле становится красным, а двоякопреломляющие кристаллы — желтыми или голубыми, в зависимости от их особенностей и ориентации по отношению к оси медленных световых волн, проходящих через красный компенсатор.
Проходя через красный компенсатор, свет преломляется и раздваивается: две световые волны, быстрая и медленная, перпендикулярны друг другу. Сходное явление возникает при прохождении света через двоякопреломляющий кристалл. Анизотропные кристаллы урата натрия имеют игловидную форму. Колебания быстрой волны ориентированы вдоль их длинной оси. Если длинная ось кристалла урата натрия параллельна направлению медленной световой волны, прошедшей сквозь красный компенсатор, возникает картина интерференции медленных и быстрых колебаний с вычитанием цвета, что приводит к желтому цвету. Желтый кристалл, длинная ось которого параллельна медленной световой волне красного конденсатора, условно называют отрицательно двоякопреломляющим. Если медленная волна колебаний двоякопреломляющего кристалла параллельна его длинной оси. а длинная ось кристалла параллельна медленному лучу красного компенсатора, суммирующий эффект медленных-плюс-медленных колебаний приводит к голубому цвету. Голубой кристалл, длинная ось которого параллельна медленной световой волне красного компенсатора, условно называют положительно двоякопреломляющим. Например, кристаллы ДПК — положительно двоякопреломляющие. При сильно выраженном свойстве двойного лучепреломления анизотропные кристаллы яркие и хорошо различимы, при слабом — кристаллы трудноразличимы и границы их стерты.
При идентификации кристаллов учитывают их форму и особенности двойного лучепреломления. Для игловидных кристаллов урата натрия характерна сильная отрицательная анизотропия. В отличие от них короткие ромбовидные кристаллы ДПК обладают положительной анизотропией. Кристаллы оксалата кальция, наблюдаемые при первичном оксалозе или при хронической почечной недостаточности, отличаются палочковидной или тетраэдрической формой и положительным двойным лучепреломлением. Кристаллам холестерина свойственны плоская или коробкоподобная форма и зазубренные углы, они часто расположены друг над другом. Сферулы с двойным лучепреломлением в форме мальтийского креста обычно представлены липидами. Однако предполагают, что некоторые формы уратов или апатитов также могут принимать подобную форму. Как правило, кристаллы гидроксиапатита трудно обнаружить в синовиальной жидклсти. отчасти вследствие отсутствия у них двойного лучепреломления. Тем не менее иногда они образуют достаточно крупные скопления, и их можно выявить окрашиванием ализариновым красным. Наконец, кристаллы глюкокортикоидных. препаратов, инъецированных в сустав с целью лечения, могут обладать свойствами двойного лучепреломления, что приводит к ошибочной интерпретации микроскопической картины неопытным специалистом.
Внутриклеточные кристаллы в анализе синовиальной жидкости свидетельствуют о кристаллической артропатии. Однако даже при выявлении кристаллов необходимо исключить сопутствующую инфекцию. Более того, у пациента может одновременно присутствовать несколько заболеваний, связанных с отложением кристаллов. Например, до 15% больных подагрой имеют также заболевание, обусловленное отложением кристаллов ДПК. Важно определить все варианты кристаллов, так как от этого зависит лечение. Больному хронической подагрой, как правило, необходима лишь гипоурикемическая терапия (и, возможно, колхицин профилактически). Однако лечение сочетания подагры и заболевания, связанного с отложением кристаллов ДПК, требует продолжительного приема нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) на фоне непрерывной гипоурикемической терапии.
Попытки аспирации воспаленного сустава не всегда успешны. Например, трудно пунктировать воспаленный первый плюснефаланговый сустав. Тем не менее, если при извлечении иглы из сустава или околосуставных тканей врач поддерживает отрицательное давление в шприце, количества интерстициальной жидкости в игле обычно достаточно для поляризационной микроскопии и определения кристаллов. Следует просто снять иглу со шприца, наполнить шприц воздухом, снова присоединить иглу и выдавить ее содержимое на предметное стекло. Такой метод особенно эффективен для поиска кристаллов урата натрия при подагре.
Бактериологическое исследование синовиальной жидкости
Моноартрит всегда следует считать инфекционным, пока не доказано обратное. Для диагностики большинства бактериальных инфекций необходимо и достаточно окраски мазка по Граму, бактериологического исследования и определения чувствительности. Как правило, синовиальную жидкость нужно лишь поместить в стерильную пробирку для бактериологического исследования и отправить в лабораторию для рутинного исследования. К сожалению, возбудители некоторых распространенных инфекций с трудом поддаются культивированию, поэтому отрицательный результат бактериологического исследования и окрашивания по Граму не обязательно исключает инфекцию. Например, результаты бактериологического анализа синовиальной жидкости более чем у 20% пациентов с гонококковым артритом отрицательны, даже если в качестве среды для посева применяли шоколадный агар. Кроме того, из синовиальной жидкости трудно культивировать туберкулез, а для культивирования анаэробных или грибковых возбудителей необходимы специальные методы и среды. Иногда микобактериальные и грибковые инфекции выявляют только с помощью биопсии синовиальной оболочки. Важно раннее начало антибактериальной терапии, поскольку бактериальные инфекции способны быстро приводить к деструкции сустава. Лечение антибиотиками следует начинать, основываясь на результатах подсчета и анализа лейкоцитов, окрашивания мазка по Граму, и при необходимости корректировать его с учетом результатов бактериологического исследования и определения чувствительности.