медицинский портал

Разделы медицины

  • Информация
    • Акушерство и гинекология
    • Детская хирургия
    • Гастроэнтерология
    • Колопроктология
    • Нейрохирургия
    • Онкология
    • Отоларингология
    • Пластическая хирургия
    • Сосудистая хирургия
    • Травматология и ортопедия
    • Урология
    • Флебология
    • Хирургия
    • Эндокринология
    • Препараты
    • Пациентам
▼ Я покупаю ссылки здесь ▼

Культивирование клеток на микроносителях

Пост опубликован: 08.12.2020

Эффективный способ придания микроносителям способности обеспечивать адгезию клеток — нанесение на поверхность гранул из незаряженного декстрана коллагена (Cytodex 3) или создание микроносителей целиком из денатурированного коллагена (Ventragel Цитолар 1 Gelatin).

В отличие от полученных положительно заряженных микроносителей на основе поперечно сшитого декстрана, коллагеновые микроносители незначительно адсорбируют компоненты питательной среды и секретируемые клетками вещества. Это дало основание считать, что коллаген и его производные являются наиболее перспективной основой для разрабатываемых микроносителей.

Для поддержания микроносителей во взвешенном состоянии пользуются различными способами. Чаще всего для культивирования на микроносителях применяются сосуды с подвешенным перемешивающим устройством (спиннеры) объемом от 2-20 мл до нескольких сотен литров. Усовершенствование конструкции спиннерных сосудов направлено на создание более мягких условий перемешивания. Происходит более эффективное прикрепление клеток к микроносителям.

Между необходимой посевной концентрацией клеток и способностью этих клеток к образованию колоний существует обратная связь. Например, для образования монослойной культуры с эффективностью клонообразования более 30% было достаточно пяти или даже меньше прикрепившихся к микроносителю клеток. Для культур с эффективностью клонообразования менее 10% число прикрепившихся к микроносителю клеток должно быть выше 103. Обычно для клеток перевиваемых линий посевная концентрация составляет 5-10х103 кл/мл при концентрации микроносителей 1-3 г/л, а для первичных клеток 15-40х103 кл/мл и до 1х103 кл/мл.

Метод культивирования клеток на микроносителях позволяет проводить визуальный контроль культур клеток. Они могут быть подготовлены для световой микроскопии и для электронно-микроскопического исследования. Для подсчёта клеток, выросших на микроносителях, культуры последних либо трипсинизируют, либо подсчитывают ядра клеток, применяя модифицированную методику Санфорд. Разработана также методика сбора клеток с микроносителей в больших объёмах. Обработка культур клеток в вибромиксере раствором трипсина позволяет собрать около 90% клеток.

Кроме обычной методики культивирования клеток на микроносителях с применением трипсина, культуры на микроносителях могут быть культивированы без применения каких-либо диспергирующих агентов. Установлено, что клетки, образовавшие монослой на поверхности культурального сосуда, мигрируют на микроносители, образуя на них монослойные культуры. Клетки могут мигрировать также с одних частиц микроносителей на другие. Уменьшение содержания в питательной среде ионов Ca2+ способствует миграции клеток от одних частиц микроносителей к другим.

Клетки, выросшие на микроносителях, можно хранить в жидком азоте двумя способами:

  • предварительно собрав клетки с микроносителей;
  • замораживая монослойные культуры на микроносителях.

Статью подготовил и отредактировал: врач-хирург Пигович И.Б.

Видео:

Полезно:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Купить другую книгу из каталога

Медицинский сайт Surgeryzone

© 2010  
Информация не является указанием для лечения. По всем вопросам обязательна консультация врача.




Adblock detector