Вирусы могут культивироваться в культурах клеток, куриных эмбрионах и лабораторных животных. Эти методы являются длительными, трудоемкими и затратными, но в то же время считаются «золотым стандартом» диагностики.
Культуры клеток, используемые для культивирования вирусов, разделяют на:
Первичные:
- получают из ткани путем механического измельчения и обработки протеолитическими ферментами;
- наиболее распространены культуры клеток почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека;
- срок жизни органичен (2-3 недели);
Полуперевиваемые:
- срок жизни увеличен, способы выдерживать 50-100 пассажей;
- наиболее распространены культуры фибробластов эмбриона человека;
Перевиваемые:
- обладают потенциальным бессмертием;
- большинство происходят из опухолевых клеток;
- наиболее распространены культуры HeLa (карцинома шейки матки), Hep-2 (карцинома гортани), RH (почка человека).
Для культивирования клеток необходимы питательные среды, которые по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие. Ростовые среды обеспечивают активное размножение клеток для формирования монослоя, а поддерживающие — переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.
Для заражения используют культуры в пробирках с хорошо развитым монослоем клеток. Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку вносят взвесь материала, предварительно обработанного антибиотиками для уничтожения бактерий и грибов.
После 30-60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят в пробирку поддерживающую среду и оставляют в термостате до выявления признаков размножения вируса.