медицинский портал

Разделы медицины

  • Информация
    • Акушерство и гинекология
    • Детская хирургия
    • Гастроэнтерология
    • Колопроктология
    • Нейрохирургия
    • Онкология
    • Отоларингология
    • Пластическая хирургия
    • Сосудистая хирургия
    • Травматология и ортопедия
    • Урология
    • Флебология
    • Хирургия
    • Эндокринология
    • Препараты
    • Пациентам

Хроматография

Использование хроматографии позволяет выявить то или иное вещество путем физического разделения исследуемого образца на отдельные содержащиеся в нем вещества. Это разделение достигается за счет разного для разных веществ распределения между неподвиж­ной и подвижной фазами. Неподвижная фаза — чаще всего очень мел­кие частицы геля, организованного на поверхности в виде тонкого слоя или упакованного в колонку. По мере того как подвижная фаза (образец и элюирующие растворители или растворы) протекает между этими частицами, молекулы того или иного вещества адсорбируются на поверхности частиц в соответствии со своими уникальными свойст­вами, что позволяет отделить их от других молекул (адсорбционный вид хроматографии). После разделения веществ их необходимо обна­ружить и измерить их концентрацию, поэтому хроматографический метод всегда используется вместе с каким-либо методом детекции.

При тонкослойной хроматографии концентрированный образец раз­водят в небольшом объеме растворителя и наносят на тонкий слой си­ликагеля, находящегося на стеклянной или полимерной подложке.

При сходной по принципу высокоэффективной жидкостной хрома­тографии неподвижная фаза (гель, в котором происходит разделение) упакована в колонку, подвижная фаза прокачивается через нее под большим давлением. Благодаря этому достигается высокая скорость потока даже при использовании очень маленьких частиц ге­ля. Чем меньше размер частиц, тем больше общая поверхность фазы, меньше диффузионное расстояние и выше разрешение анализа, но из-за малого расстояния между частицами больше и сопротивление потоку, для преодоления которого и необходимо высокое давление. Высокоэффективная жидкостная хроматография занимает меньше времени, чем тонкослойная.

Газовая хроматография основана на том же принципе, что высоко­эффективная жидкостная, но в этом случае подвижная фаза представ­ляет собой не жидкость, а газ (обычно гелий, в некоторых случаях азот). Из-за низкого сопротивления газовому потоку достигается его высокая скорость, что позволяет использовать для анализа значитель­но более длинные колонки, чем при высокоэффективной жидкостной хроматографии, добиваясь тем самым высокого разрешения.

Газовая хроматография используется только для разделения моле­кул, которые могут перевестись в газовую фазу при температуре ниже 300 градусов; при температуре больше 300 градусов может начаться разруше­ние неподвижной фазы. Летучесть вещества определяется в основном величиной его молекулы и ее способностью образовывать водородные связи. Если в формировании водородных связей участвуют аминогруп­пы, гидроксильные или карбоксильные группы, в такие молекулы мож­но ввести заместители атомов водорода, по возможности крупные; благодаря этому пространственный доступ к электронным парам на атомах азота и кислорода становится затрудненным. Для введения в молекулы групп заместителей используют различные химические реа­генты. Чаще всего в молекулы вводят три мети леи л ильную группу. По­лученные производные молекулы, несмотря на возросшую молекуляр­ную массу, не образуют водородных связей и поэтому значительно лег­че переводятся в газовую фазу.

При проведении газовой хроматографии используют различные спо­собы детекции, чаше всего — метод пламенной ионизации. Выходя­щие из колонки органические вещества сгорают, образуя заряженные промежуточные продукты окисления. Последние в электрическом по­ле создают электрический ток, который и измеряют. Другой метод де­текции — масс-спектрометрия — имеет высокую чувствительность и специфичность. Он основан на распознавании ионизированных моле­кул вещества по соотношению «масса/заряд». При ионизации молекул веществ образуется, как правило, несколько таких ионов; сигнал, по­лученный при их регистрации, образует масс-спектр. Масс-спектр ка­ждого вещества обычно уникален.

Полезно:

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *


Медицинский сайт Surgeryzone

© 2010  
Информация не является указанием для лечения. По всем вопросам обязательна консультация врача.